Hdppz配体的钌配合物作为单线态氧荧光探针的应用
我们最近报道了 一个铼（I)配合物的单线态氧荧光探针[Y. J.Liu，K.Z.Wang， Eur. J. Inorg. Chem.，2008, 5214.]和一个中国发明专利申请[王科志，刘艳菊，陈 春辉，钌和铱金属配合物单线态氧荧光探针的制备及其应用，中国发明专利，申请号 200810240591. 4]。这些配合物虽可在可见光激发下检测单线态氧，但无单线态氧存在时该 配合物表现出较大的背景荧光，且水溶性、单线态氧的检测灵敏度与选择性仍需进一步改 进。因此进一步制备具有水溶性好、灵敏度高、选择性好，适用范围广，可见光激发的单线态 氧荧光探针具有重要的现实意义。
本发明的目的是开发荧光增强倍数大和丸检测限低的新型丸荧光探针。技术方案如下：将含有Hdppz配体的钌配合物作为单线态氧荧光探针，对物质体系中的单线态氧 进行定性和定量分析。所述钌配合物的结构通式为[RuAmLn]Xk，其中：X为抗衡离子；L为 6-轻基-二批陡并 ，3' -c)吩嗪（6-Hydroxy-dipyrido[3,2-8:27，3' -c] phenazine，简称Hdppz)，其结构如式I所示；A为N~N辅助配体；m = 0或2, η = 1或3,且 m+n = 3 ;k = 1 或 2。A为辅助配体，常用的N~N辅助配体例如联吡啶（bpy)和邻菲咯啉（phen)，但 并不限于这两种配体。抗衡离子X多为负一价的阴离子，例如Cl_，PF6_，C104_，N0 3_，BF4_，CF3S03_。当 x为负一价阴离子时，k = 2;当X为负二价阴离子时，k= 1。在氮气保护下，将[Ru(A)m]Cl(W2)与配体L在溶剂中加热至100-140°C进行配位 反应，反应结束后，加入含有抗衡阴离子X的盐，搅拌反应一定时间。粗产品再重结晶或是 柱层析（硅胶或氧化铝）提纯，获得本发明的钌配合物。
该以Ru为中心离子的单线态氧荧光探针的应用过程为：在中性或碱性溶液中，利 用所述的配合物作为荧光探针捕获体系中的％后，使体系的荧光强度显著增强，通过可见 光激发的荧光测定法可以检测体系中的％。具体步骤是：
1.在已知的能有效产生单线态氧的中性或碱性体系中加入本发明的配合物，在一 系列的单线态氧浓度条件下，通过可见光激发测定体系的荧光强度和吸光度，得到相对应 的荧光量子效率，获得荧光量子效率相对于单线态氧浓度的标准曲线；
2.在含所述配合物的中性或碱性缓冲溶液中加入一定量的待测溶液，通过可见光 激发测定体系的荧光强度和吸光度，计算得到其荧光量子效率；
3.根据步骤2测得的荧光量子效率的值，通过步骤1获得的标准曲线确定待测溶 液中含有的单线态氧的量。
采用Hdppz为配体的钌配合物作为单线态氧荧光探针，其水溶性好而本身 荧光很弱，可见光激发且与单线态氧反应后导致荧光强度大幅度增强。其优点主要有：1、水溶性好，该钌配合物探针易溶于水，可在各种缓冲溶液中使用，克服了水不溶 性荧光探针需要加入有机溶剂帮助溶解而对测定带来的干扰，非常适用于生物体系中丸 的测定。2、具有较好的选择性，与其他的活性氧物种（Η202, • 0H，0N0CT)作用荧光信号几乎 无变化。3、具有较高的单线态氧检测灵敏度，检测下限可达19. 5nM。4、探针与丸作用后荧光强度增强因子大，最高可达170倍。