免疫金铂纳米合金催化共振散射光谱测定hCG原理
人绒毛膜促性腺激素(hCG), 是由孕妇胎盘合体的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白, 由α-和β-两个亚单位构成, 它是妊娠的重要诊断标记以及最重要的肿瘤标记物之一. 健康女性在血清或尿液中的hCG含量一般低于14.3 mIU/mL, 如果hCG的含量升高, 则有可能是怀孕或是与滋养层的疾病有关. 因此, 对hCG进行定量检测具有重要的临床意义.
目前, hCG的检测方法主要有电化学免疫分析法、电化学发光免疫分析法、非标记安培免疫分析法、化学发光免疫分析法、光致发光法、荧光免疫分析法、共振散射光谱法、酶免疫分析法、放射免疫分析法、原子发射法等. 这些方法当中, 电化学免疫分析法操作简单方便、稳定; 荧光免疫分析法简单、快速, 但在实际检测分析中存在本底荧光的干扰; 酶免疫分析比放射免疫分析更加灵敏, 简便灵活, 但酶价格较贵; 放射免疫分析法灵敏度高、特异性强、应用广泛, 有放射线辐射和污染的可能; 化学发光灵敏度较高、检测快速, 但操作步骤较为复杂. 共振散射光谱法具有灵敏、快速、简便等特点, 已应用于痕量抗原的免疫测定. 基于纳米金的生物相容性和共振散射效应, 发展了灵敏度较高的免疫纳米金和适配体纳米金共振散射光谱分析法.将纳米金标免疫反应与纳米金催化反应结合, 建立了高灵敏高选择性的免疫纳米金催化共振散射光谱法.
广西师范大学梁爱惠等人以NaBH4为还原剂, 制备了金与铂物质的量比为49∶1 的金铂纳米合金(GP). 用兔抗人绒毛膜促性腺激素抗体(RhCG)修饰AuPt获得了免疫纳米合金探针(GP-RhCG). 在pH5.8磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液及KCl存在的条件下,GP-RhCG探针发生非特异性聚集, 在590 nm处有一个较强的共振散射峰. 当有人绒毛膜促性腺激素(hCG)存在时, 聚集的GP-RhCG探针与hCG发生特异性结合, 生成分散性较好的GP-RhCG-hCG免疫复合物, 导致590 nm处共振散射峰强度降低. 其共振散射峰强度降低值ΔI590 nm与hCG浓度在6.67～86.7 g/mL范围内呈现良好线性关系. 免疫反应液中形成的GP-RhCG-hCG免疫复合物对葡萄糖-铜(II)体系具有较强的催化作用。