抗体与金粒子的结合力
抗体的Fc片段紧紧吸附在金颗粒表面上，这样围绕着金颗粒的双电子层表面的Fab片段就突出在外面，这样Fab就能吸附分析物。胶体金上标记抗体时，不能有过量的待标记抗体存在。因为过量的游离的抗体会跟胶体金上的抗体与抗原发生竞争反应，导致出现假阴性，而且过量的抗体蛋白会影响到标记物的稳定性。蛋白质和胶体金结合的最佳条件在蛋白质的等电点附近。
蛋白通过以下机制于几秒之内吸附于金表面：
(1) 金粒子所带负电荷与蛋白内氨基酸（如赖氨酸）所带阳性电荷的最初的相互吸引
(2)蛋白通过某些氨基酸残基包括色氨酸与金粒子表面之间的疏水吸附作用
(3)蛋白中的半胱氨酸的硫基与金粒子间的配价结合