一种可用于快速诊断的免疫胶体金颗粒制备方法
胶体金技术的起源可追溯到1971年，Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门菌，将胶体金首先引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，广泛应用于电镜水平研究、光显微细胞化学、免疫沉淀及蛋白质染色等技术，并且被引进免疫诊断领域中，尤其在医学检验的快速诊断领域显示出了巨大的发展前景。免疫胶体金技术在快速诊断领域的应用主要由于该技术与其他检测方法相比，具有无可比拟的优势:简便快捷，不需要任何仪器和设备，并可在几分钟之内出检测结果；结果可靠，灵敏准确；成本低廉，需用样本量少。胶体金技术已广泛用于医学检验的快速诊断应用中，如早孕检测、传染病的快速诊断等，但医学检验技术需要有较高的特异性与灵敏度，因此其应用对胶体金的颗粒大小和粒径均一性要求较高。已有研究表明，胶体金颗粒粒径在IOlOnm左右时，方法的特异性与灵敏度较好，而现有胶体金颗粒制备普遍使用的工艺为柠檬酸三钠还原法，所获得的胶体金颗粒在此粒径范围内的尺寸大小不易控制，粒径分布不够均一，严重影响了其在快速诊断中的应用。
本文的目的：避免背景技术中的不足之处，设计一种颗粒形态控制、颗粒尺寸控制、粒径均一性等方面较现有方法均有较大程度提升的一种可用于快速诊断的免疫胶体金颗粒制备方法。
具体方案：为了实现上述设计目的。本方案用氯金酸作为还原原料进行金颗粒的制备。用硼氢化钠作为强还原剂，在较短的时间内快速还原氯金酸，形成小粒径的金种。用十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)作为保护剂，控制金种形成过程，以保证胶体金颗粒均匀生长。大粒径(>30nm)胶体金颗粒的合成用盐酸羟胺和抗坏血酸作为还原剂，因其还原条件较为温和，可促进金离子在金种上缓慢沉积，较易形成均一的胶体金颗粒。本申请针对背景技术存的不足，设计了一种可用于快速诊断的免疫胶体金颗粒制备方法，主要包括以下步骤:
1、在温度为35°C的水浴条件下，先后加入氯金酸(HAuC14)、十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)和超纯水，使得溶液中氯金酸浓度为0.25mmol/L, CTAB浓度为75mmol/L，搅拌混匀，Γ6πΰη后，再加入终浓度为0.6mmol/L的NaBH4,快速搅拌2〜3min，然后缓慢搅拌；
2、继续水浴2〜12h，使溶液中NaBH4挥发完全，即完成3〜4nm金颗粒的合成；
3、当合成粒径在30nm以下的胶体金颗粒时，以已合成的3〜4nm金颗粒为金种进行合成:以1:200的比例稀释金种溶液，依次添加CTAB和氯金酸，使得溶液中的CTAB浓度为16mmol/L,氯金酸浓度为0.04"!.llmmol/L,定容至略少于目标体积,然后加入终浓度为6mmol/L抗坏血酸，最后加入占最终合成的胶体金溶液总体积1/1000的金种稀释液，此步骤中氯金酸加入量的不同可合成30nm以下不同尺寸范围的金颗粒；
4、当合成粒径在30nm以上的胶体金颗粒时，以已合成的30nm金颗粒为金种进行合成:以1:200的比例稀释金种溶液，依次加入盐酸羟胺(NH3OH.HCl)和氯金酸，使得溶液中的盐酸轻胺浓度为7.76〜18.10mmol/L,氯金酸浓度为0.78〜1.81mmol/L,搅拌混勻；
5、待反应5〜8h后，每隔Ih加入少许氯金酸，加三次；
6、继续反应a,得到胶体金溶液。
本方案的优势：一是所获得的金颗粒粒径大小较均一、形态均保持正球形，可满足胶体金快速诊断试剂应用所需的较高特异性和较高灵敏度要求；二是制备条件较容易控制，批间重复性较好；三是制备方法步骤简单，容易进行放大；四是不仅克服了传统制备方法所获得的胶体金颗粒形态不规则、大小不均一的缺陷，同时对工艺技术进行改进，使得所制备胶体金颗粒能自由调整颗粒大小，以适用于不同的检测项目，使得检测结果更加准确可靠。