金标羊抗人IgA-IgA体系的共振散射光谱
免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)普遍存在于血液、组织液、淋巴液和外分泌液中, 在人类免疫应答中起关键作用. 测定血清中免疫球蛋白A(IgA)的含量对诊断和指导治疗肝脏疾病、结缔组织疾病和肾病有实际的临床意义. 目前, 检测IgA的方法主要有琼脂单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法、酶免疫分析法(EIA)、免疫荧光法、金标记阳极溶出伏安免疫分析法及免疫比浊法等. 扩散法需要检测双份血清的滴度改变, 影响因素较多, 耗时长, 已逐步被其它方法所取代.
火箭免疫电泳法IgA的检出限为5.5 ng•mL－1, 比扩散法的灵敏度提高了8倍, 但灵敏度仍不高. Peebles等用非竞争性酶免疫分析测定IgA的线性范围为15～550 ng•mL－1; Bianchi等采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体, 通过双抗体夹心酶联免疫吸附分析(DAS-ELISA) IgA的检出限为42 ng•mL－1; ELISA法的灵敏度高, 特异性强, 但是提纯免疫球蛋白和制备酶标记物的过程较长, 两次抗原抗体的结合反应, 孵育时间长达3～4 h, 试剂成本较高. 免疫荧光法常用异硫氰酸荧光黄(FITC)标记抗体, 可用于IgA定性和定量分析,但方法的相关系数较差, 操作烦琐、费时. 有文献将兔抗人IgA通过物理吸附固定于聚苯乙烯微孔板上再与抗原IgA反应, 然后再通过夹心模式捕获相应的纳米金标记的羊抗人IgA抗体, 大大提高灵敏度, 可测线性范围为0.018～181μg•mL－1. 免疫比浊法分为透射和散射比浊法两种, 前者操作简便快速, 结果精密度可达到临床要求; 后者自动化程度高, 检测时间短, 精密度和灵敏度优于透射比浊法. 还有文献通过流动注射进样, 用分光光度法检测IgA的线性范围为90～360μg•mL－1,但灵敏度不够高. 胶体金标记技术不存在内源酶干扰及放射性同位素污染等问题, 已成为继荧光素、酶、同位素及胶乳标记技术之后的一种新型标记技术, 在药物检测、生物医学等许多领域发展迅速. 共振散射光谱法具有快速、简便、灵敏等特点, 已用于痕量无机物、有机物等的分析, 获得了比较好的效果.
为进一步提高共振散射光谱法的选择性和灵敏度, 广西师范大学环境与资源学院蒋治良等人将缔合物反应、催化反应和免疫反应与共振散射光谱有机结合起来, 取得了较好的效果, 但检测人血清中免疫球蛋白A的纳米金标免疫共振散射光谱法尚未见报道.
随后他们将纳米金的共振散射效应和纳米金标记免疫反应结合起来建立了一种测定免疫球蛋白A的新方法. 采用柠檬酸三钠改良法制备了粒径约为10 nm的纳米金, 用于标记羊抗人免疫球蛋白A获得了免疫球蛋白A (IgA)的免疫共振散射光谱探针. 在pH 5.6的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液和PEG 6000存在下, 金标羊抗人免疫球蛋白A与IgA产生特异性结合, 引起金纳米粒子聚集, 导致金纳米粒子580 nm处的共振散射峰增强. 对免疫分析的条件进行了优化, IgA 浓度在0.0054～1.35 μg•mL－1范围内与580 nm 处的共振散射强度呈线性关系, 方法的检测限(3σ)为2.0 ng•mL－1, 相关系数为0.9983. 用于定量分析人血清中的免疫球蛋白A, 结果满意.