金纳米颗粒介导的IVS-2-654位点不对称PCR
单链核酸探针由于不存在互补双链的竞争性结合,其杂交效率及检测灵敏性高, 广泛用于现代生物医学诊断与检测等领域. 单链核酸一般采用不对称PCR或M13噬菌体制备,M13噬菌体以单链的方式大量表达插入的外源DNA片段,但外源DNA片段的限制性内切酶酶切及纯化等下游操作较复杂.不对称PCR技术是获取单链DNA的一种重要方法. 但是传统不对称PCR 需要优化模板和引物浓度及退火温度等, 操作烦琐且耗时. 迫切需要发展高效快速的不对称PCR扩增技术. 国内外一些研究者在此方面有一些研究, 如Sanchez等发展了一种改良不对称PCR(Linear After The Exponential aPCR), 进行Tay-Sachs疾病的检测;Zhu等利用多重不对称PCR进行抗药性基因分析.
湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室王柯敏等人发展了一种利用金纳米颗粒介导的不对称PCR快速制备单链核酸的新方法. 浓度为0.1～0.5 nmol/L金纳米颗粒可显著改善PCR扩增特异性, 提高扩增效率. 在不对称PCR扩增中, 加入合适浓度的金纳米颗粒方便快捷得到单链核酸产物, 不需要进行复杂的条件优化等操作步骤. 通过快速制备地中海遗传病两个点突变CD17(A→T)和IVS-2-654 (C→T)位点的单链DNA靶序列, 证实该方法是一种简便、有效的获得单链核酸的方法, 有望在单链核酸技术领域发挥重要作用.