金纳米探针同时检测三种氨基硫醇
目前主要采用高效液相色谱法(HPLC)及毛细管电泳法对氨基硫醇进行分离分析。由于氨基硫醇分子结构中没有发色基团,直接采用短波长的紫外检测(UVD)虽然方法简单且费用低廉,但缺点亦很显著,除灵敏度低外,更重要的是干扰严重,尤其是在基底复杂的生物样品中,很难获得准确结果。因此,上述已报道的方法一类是基于氨基硫醇的衍生化反应-荧光检测而建立;另一类无需衍生的检测方法包括电化学或与质谱联用。但前者的测定精度问题仍然是其难以克服的缺点,后者则因分析费用昂贵与实际需要仍存在一定的距离。
金纳米粒子( goldnanoparticle, AuNPs)由于具有独特的光学特性、良好的生物相容性以及易于表面修饰等优点,在生物和医药等领域的应用越来越受到人们的关注。近年来的研究证实,AuNPs经含氟表面活性剂修饰后,能够在适当的高温下被小分子巯基化合物引起特异性的快速积聚,因而可作为柱后探针试剂进行在线检测,亦可用于复杂样品中巯基化合物的富集分离,通过去除基底干扰物质、富集纯化目标物,帮助提高传统检测技术的选择性、灵敏度及准确度。 通常依照Tseng法制备的AuNPs(即以氯金酸和柠檬酸钠进行制备)因溶液中存在的柠檬酸根致使AuNPs表面带有负电荷,因此会因静电作用吸附而带有相反电荷的物质,难以获得高的富集效率。其改进的做法是采用非离子表面活性剂进行修饰,以构成复合纳米粒子从而降低表面负电荷数量,有效提高其对氨基硫醇的捕获能力。
广西师范大学卢昕等人建立了金纳米粒子富集-高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UVD)同时测定人血浆中3种氨基硫醇(半胱氨酸(Cys)、高半胱氨酸(Hcys)、谷胱甘肽(GSH))的新方法。 以 Tween 20修饰的金纳米粒子作为选择探针萃取富集氨基硫醇。经二硫苏糖醇脱附后,采用SpursilTMC18柱(250 mm×4.6mm, 5 μm)分离氨基硫醇,以60 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 2.0)等度洗脱,检测波长为200 nm。3 种氨基硫醇的浓度分别在0.025 ~ 350 μmol / L、0.02 ~ 60μmol / L、0.01 ~ 50 μmol/L 内与峰面积具有良好的线性关系,相关系数均高于 0.99。 方法检出限(信噪比为3)分别为 5.0、6.0 和2.5 nmol / L,回收率为 92.8% ~ 106.0%。 该方法能显著降低血浆样品中内源性物质的干扰,提高HPLC-UVD 的选择性和灵敏度。将该方法应用于心血管病人血浆中上述氨基硫醇的分离测定,结果显示:与对照组相比,疾病组血浆中的Hcys和GSH水平存在显著性差异,Cys不存在显著性差异。